DPO™ Technology

Super multiplex PCR

DPO™ 기술이란?

DPO™ (Dual Priming Oligonucleotide)는 비특이적인 priming으로 인한 extension이 발생하지 않으므로 높은 특이성을 유지할 수 있는 프라이머 (primer)입니다. DPO™ 기술은 다수 병원체 및 SNP 검출, genotyping과 같은 다양한 분자진단 분야에서 유용하게 사용할 수 있습니다.




DPO™ 구조 및 원리

DPO™ 프라이머는 polydeoxyinosine [poly (I)] linker의 삽입으로 인해 두 개의 priming 부위를 가지고 있습니다. 이러한 Dual priming 을 통해 target 유전자만 특이적으로 증폭 가능합니다.

디자인할 수 있는 부위가 자유롭고 PCR 성능을 높여줌


Step 1: Poly(I) linker activation
Deoxyinosine은 일반적인 nucleotide 보다 약한 수소결합으로 인해 상대적으로 낮은 Tm 값 (Tm < 2 ℃)을 가지고 있습니다. 그로 인해 특정 온도에서 'bubble-like structure'를 형성하여 5' -end와 3' -end 부분이 각각 "Stabilizer"와 "Determiner"로 구분 됩니다.

Step 2: First priming reaction
DPO™의 긴 염기 서열인 5'-end는 'Stabilizer'로서 target sequence에 안정적으로 결합하여 annealing을 시작합니다.

Step 3: Second priming reaction
DPO™의 짧은 염기 서열인 3'-end는 'Determiner'로서 target sequence의 나머지 부위에 결합하여 정확한 extension 반응을 유도합니다.


DPO™ 특징

DPO™ 는 PCR 조건을 optimization하는데 소요되는 시간과 노력을 줄여주며, primer 길이, GC content, annealing 온도, sequence(hairpin, self or cross dimer로 인한 이차 구조)와 같은 primer design시에 고려해야 할 조건에서 일반 primer 보다 자유롭게 디자인 할 수 있게 해줍니다.

Comparison between DPO™ primer VS. Non-DPO™ primer


1) DPO™는 여러가지 annealing 온도조건에서도 높은 특이성을 나타냅니다.

annealing 온도 변화조건에서 특이성을 보여주는 DPO™ Conventional primer는 높은 특정 annealing 온도에서만 특이성을 나타내고, annealing 온도가 낮아지면 non-specific band와 같은 false product이 생성됩니다 (lanes 1 and 3).

DPO™ primer는 annealing 온도가 변하더라도 정확한 target 유전자 만을 증폭할 수 있습니다(lanes 2 and 4).

M: Size marker
Lane 1, 3: Conventional Primer
Lane 2, 4: DPO™ Primer


2) GC 함량 (%)이 높은 조건에서도 target sequence만 정확하게 증폭합니다.

Multiplex-PCR 수행시 primer간의 dimer 형성 또는 competition이 없음

Conventional primers를 사용 한 multiplex PCR에서는 primer간의 competition, dimer 형성, 서로 다른 annealing 온도로 인해 non-specific band를 증폭될 수 있습니다 (Fig. A).

DPO™를 사용한 multiplex PCR에서는 dual priming 으로 인해 primer 간의 dimer 및 hairpin 형성이 억제 됨으로써 specific target band만 정확하게 증폭됩니다 (Fig. B).


3) Multiplex PCR 수행 시 primer 간의 dimer 형성 또는 competition이 없습니다.

annealing 온도 변화조건에서 특이성을 보여주는 DPO™ DPO™는 GC 함량이 높은 조건에서도 non-specific band가 없이 오직 target band만을 정확하게 증폭합니다.

M: Size marker
Lane 1: Short conventional primer
Lane 2: Long conventional primer
Lane 3: DPO™ primer

◀ GC 함량이 높은 target sequence를 증폭한 사례


4) 다양한 분자진단 분야 적용가능

· Multiple pathogen detection
- 한번에 다양한 원인균 및 바이러스를 동시 검사

· Multiple genotyping
- 다양한 병원체의 유전자형 (genotype), 아형(subtype) 감별 검사

· Multiple SNP & mutation detection
- 약제 내성, 유전질환 돌연변이 검사, 암 진단 검사
이 제품은 "의료기기"이며, "사용상의 주의사항""사용방법"을 잘 읽고 사용하십시오.
유전자증폭장치용시약 / 광고심의필 : 심의번호 2013-I10-01-0816
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