TOCE™ Technology

The New Paradigm for High multiplex Real-time PCR

기술 개요

High multiplex Real-time Quantitative PCR

TOCE™는 homogeneous system에서 다수의(5개이상의) 목표 유전물질 검출과 유전변이를 확인 가능하게 하는 기술입니다. TOCE™는 일반 real-time platform을 이용하여 하나의 튜브에서 동시에 다수의 병원체를 정성검사는 물론 Cyclic Catcher Melting Temperature Analysis (cyclic-CMTA)를 기반으로 한 정량적 분석까지 구현할 수 있는 방법입니다.

TOCE™를 이용한 검사는 저렴한 검사 비용으로 질병을 유발하는 병원체에 대한 다양한 정보를 신속하게 제공하여 정확한 진단과 치료가 가능하게 합니다. 따라서 TOCE™ 기술을 기반으로 하는 검사법은 "효과적인 환자치료"에 필요한 양질의 풍부한 정보를 제공해 줄 수 있는 분자진단의 새로운 패러다임 입니다.


기술 논문

Seegene Bulletin - VOLUME 1 JULY 2012

THE SCIENCE AND BUSINESS OF MOLECULAR DIAGNOSTICS

  1. High Multiplex Molecular Diagnostics - Shifting the Diagnostics Paradigm Jong-Yoon Chun. Ph D
  2. TOCE : Innovative Technology for High Multiplex Real-time PCR Dae-Hoon Lee, Ph.D.
  3. cyclic-CMTA : An Innovative Concept in Multiplex Quantification In-Taek Hwang, Ph.D.
본 제품의 자료가 필요하신분은 자료요청을 해주시면 자료를 보내드리겠습니다.

기술특징

1. TOCE™ 기술의 원리

TOCE™기술의 핵심요소는 DPO™ primer와 Pitcher & Catcher 입니다. DPO™primer는 씨젠의 특허받은 target specific primer 기술로 해당 유전자부위를 매우 특이적으로 증폭시켜줍니다. Pitcher는 Target 유전자에 특이적으로 중합하는 부위와 Tagging portion을 포함하는 단일가닥 올리고 이며 Catcher는 형광이 붙어있는 Artificial template입니다.

TOCE™ 기술의 원리

2. Catcher-Tm 분석을 이용하여 단일 채널에서 동시다중 검사

TOCE™ 기술은 하나의 채널에서 여러 병원체에 대한 동시 확인이 가능합니다. 형광 signal은 실시간으로 확인되기도 하며 Catcher의 융해온도 (Catcher-Tm)를 분석하여 Target의 존재여부를 확인할 수도 있습니다.

Catcher-Tm 분석을 이용하여 단일 채널에서 동시다중 검사

3. 자유로운 Catcher-Tm value 조절가능

TOCE™기술의 독특한 특징으로 "Catcher"가 있습니다. 형광분자가 붙어있는 Artificial template인 Catcher는 각 Target에 해당하는 형광 signal을 생성합니다. Catcher-Tm값은 Catcher의 길이나 염기서열을 변화시켜서 조절할 수 있습니다. TOCE™반응의 적합화를 위해서 Catcher-Tm값은 Target의 염기 서열과는 관계없이 손쉽게 바꿀 수 있습니다.

자유로운 Catcher-Tm value 조절가능

4. 병원균의 염기서열 변화에 관계없이 일정한 Catcher-Tm value

현재 사용하고 있는 Tm기반의 분석방법은 병원체의 염기서열 변화가 생길경우 Tm value 차이를 갖게 됩니다. 그러나 TOCE™ 기술을 염기서열의 변화에 영향을 받지 않아 일정한 Catcher-Tm 값을 가질 수 있습니다.

병원균의 염기서열 변화에 관계없이 일정한 Catcher-Tm value

5. Singleplex real-time PCR과 동등한 민감도

TOCE™ 기술을 이용한 Multiplex target의 검출한계는 probe 방식의 Single target real-time PCR과 동일한 수준의 민감도를 제공 합니다.

Singleplex real-time PCR과 동등한 민감도* 10-plex real-time PCR : 7 analytes + dual target for CT & NG + IC (Chlamydia trachomatis; Neisseria gonorrhoeae; Trichomonas vaginalis; Mycoplasma hominis; Mycoplasma genitalium; Ureaplasma urealyticum; Ureaplasma parvum) ** Singleplex real-time PCR : 1 analyte (C. trachomatis)

6. cyclic-CMTA를 이용한 동시다중 정량적 분석

Real-time PCR 과정 중에 cyclic-CMTA point를 설정하여 감염된 병원체의 감염 유무 뿐 아니라 정량적인 분석 결과를 동시에 확인할 수 있습니다. 그림처럼 cyclic-CMTA point는 real-time PCR 과정 중에 30, 40, 50 cycle에 설정할 수 있으며, 결과 분석 시 표에서처럼 감염된 병원체의 양에 따른 melting peak의 양상에 따라 정량적인 분석을 수행할 수 있습니다.

cyclic-CMTA를 이용한 동시다중 정량적 분석 cyclic-CMTA 분석을 통해 한번에 다수의 HPV 유전자형에 대한 감염여부 및 바이러스의 정량적 분석을 할 수 있습니다.

실례에서 보듯이 HPV33의 경우 융해곡선은 첫 번째 cyclic-CMTA point (cycle 30)에서 검출되어 high copy수로 존재한다고 할 수 있으며, HPV16의 경우는 융해곡선이 두 번째 cyclic-CMTA point (cycle 40)에서, HPV18 융해곡선은 세 번째 cyclic-CMTA point (cycle 50)에서 검출되어 각각 intermediate copy, low copy수로 존재한다고 할 수 있습니다. 이러한 분석방법은 다양한 HPV 유전자형의 정량적 분석, HPV의 중복감염여부, 유지, 제거 정보를 제공함으로써 자궁경부암에 대한 적극적인 선별 검사에 도움을 줄 수 있습니다.

7. 한개의 튜브에서 다수의 mutation 검출

TOCE™ 기술은 한 개의 염기서열도 정확하게 구별할 수 있어 mutation을 검사하는데 효과적이며, 특히 다수의 mutation을 동시에 검사하는데 유용합니다. 예에서 보듯이, mutation 특이적인 Pitcher가 해당 mutation이 발생한 위치에 중합했을 때만 mutation signal이 발생하므로 wild-type과 mutation을 정확하게 구분할 수 있습니다.

한개의 튜브에서 다수의 mutation 검출
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유전자증폭장치용시약 / 광고심의필 : 심의번호 2013-I10-01-0838
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