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DPO™ (Dual Priming Oligonucleotide)는 비특이적인 priming으로 인한 extension이 발생하지 않으므로 높은 특이성을 유지할 수 있는 프라이머 (primer)다. DPO™ 기술은 다수 병원체 및 SNP 검출, genotyping과 같은 다양한 분자진단 분야에서 유용하게 사용된다.
DPO™ 프라이머의 구조와 원리
DPO™ 프라이머는 polydeoxyinosine [poly (I)] linker의 삽입으로 인해 두 개의 priming 부위가 있다. 이러한 Dual priming 을 통해 target 유전자만 특이적으로 증폭 가능하다.
Step 1: First priming reaction
DPO™의 긴 염기 서열인 5'-end는 'Stabilizer'로서 target sequence에 안정적으로 결합하여 annealing 한다.
Step 2: Second priming reaction
DPO™의 짧은 염기 서열인 3'-end는 'Determiner'로서 target sequence의 나머지 부위에 결합하여 정확한 extension 반응을 유도된다.
증폭 오류를 사전에 방지하여 탁월한 특이도 구현
DPO™ 프라이머는 타겟이 아닌 template에서는 프라이머와의 결합을 원천적으로 막음으로써 위양성 신호를 발생시킬 수 없어 다중 타겟 PCR 검사에서도 탁월한 특이도를 보여준다.
A. DPO™ 프라이머의 더 긴 5’말단 부분이 non-target 부위에 결합하려고 해도 짧은 부분에서 비특이적 결합을 막아준다.
B. 짧은 3' 말단 부분만의 결합으로는 template가 복제되지 않는다.
DPO™ 프라이머를 이용한 멀티플렉스 PCR 검사는 정확하고 빠른 검사를 구현 한다.
결과 예시
DPO ™ 와 기존 프라이머의 다중 PCR 결과 비교
DPO ™ 프라이머는 비특이적 인 증폭을 제거하고 원하는 타겟 밴드만을 증폭시켰다. 그러나, 기존 프라이머는 비특이적 증폭을 제거하지 못했다.
A. Conventional primers
P: Positive marker N: Negative marker / Lane 1~5: Samples
B. DPO™ primers
P: Positive marker N: Negative marker / Lane 1~5: Samples