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TOCE™

다수의 타겟을 온도에 상관없이 정확하게 형광 반응할 수 있도록 컨트롤 하는 Real-time PCR 기반의 기술

TOCE™는 homogeneous system에서 다수의(5개이상의) 목표 유전물질 검출과 유전변이를 확인 가능하게 하는 기술이다. TOCE™는 일반 real-time platform을 이용하여 하나의 튜브에서 동시에 다수의 병원체를 정성검사는 물론 Cyclic Catcher Melting Temperature Analysis (cyclic-CMTA)를 기반으로 한 정량적 분석까지 구현할 수 있는 방법이다.

TOCE™를 이용한 검사는 저렴한 검사 비용으로 질병을 유발하는 병원체에 대한 다양한 정보를 신속하게 제공하여 정확한 진단과 치료가 가능하다. 따라서 TOCE™ 기술을 기반으로 하는 검사법은 "효과적인 환자치료"에 필요한 양질의 풍부한 정보를 제공해 줄 수 있다.

기술의 특징

  • Catcher-Tm 분석을 이용하여 단일 채널에서 동시다중 검사
  • 자유로운 Catcher-Tm value 조절가능
  • 병원균의 염기서열 변화에 관계없이 일정한 Catcher-Tm value
  • Singleplex real-time PCR과 동등한 민감도
  • cyclic-CMTA를 이용한 동시다중 정량적 분석
  • 한개의 튜브에서 다수의 mutation 검출

TOCE™ 기술의 원리

TOCE™기술의 핵심요소는 DPO™ primer와 Pitcher & Catcher 다. DPO™primer는 씨젠의 특허받은 target specific primer 기술로 해당 유전자부위를 매우 특이적으로 증폭 시킨다. Pitcher는 Target 유전자에 특이적으로 중합하는 부위와 Tagging portion을 포함하는 단일가닥 올리고 이며 Catcher는 형광이 붙어있는 Artificial template다.

형광분자가 붙어있는 Artificial template인 Catcher는 각 Target에 해당하는 형광 signal을 생성한다. Catcher-Tm값은 Catcher의 길이나 염기서열을 변화시켜서 조절할 수 있다. TOCE™반응의 적합화를 위해서 Catcher-Tm값은 Target의 염기 서열과는 관계없이 손쉽게 바꿀 수 있다.

기존 융해곡선 진단 기술은 약간의 유전자의 염기변이로도 융해 온도가 변화되어 정확한 검사 결과가 요구되는 임상 진단 분야에서는 사용이 제한되어 왔다. 하지만 TOCE™ 기술은 염기변이가 있어도 융해온도가 변화하지 않고 일정한 결과 값을 갖게 되므로 다양한 병원체의 동시진단이 가능하다.

cyclic-CMTA를 이용한 정량적 분석

Real-time PCR 과정 중에 cyclic-CMTA point를 설정하여 감염된 병원체의 감염 유무 뿐 아니라 정량적인 분석 결과를 동시에 확인할 수 있다. 그림처럼 cyclic-CMTA point는 real-time PCR 과정 중에 30, 40, 50 cycle에 설정할 수 있으며, 결과 분석 시 표에서처럼 감염된 병원체의 양에 따른 melting peak의 양상에 따라 정량적인 분석을 확인할 수 있다. 

Technical Papers

Seegene Bulletin - VOLUME 1 JULY 2012

THE SCIENCE AND BUSINESS OF MOLECULAR DIAGNOSTICS

  • High Multiplex Molecular Diagnostics - Shifting the Diagnostics Paradigm ｜ Jong-Yoon Chun. Ph D
  • TOCE : Innovative Technology for High Multiplex Real-time PCR ｜ Dae-Hoon Lee, Ph.D.
  • cyclic-CMTA : An Innovative Concept in Multiplex Quantification ｜ In-Taek Hwang, Ph.D

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